Si la fuerza del campo eléctrico aplicado y la duración de la exposición al mismo se eligen correctamente, los poros formados por el pulso eléctrico se sellan tras un corto periodo de tiempo, durante, el cual, los compuestos extracelulares tienen la oportunidad de entrar a la célula; sin embargo, una exposición excesiva a campos eléctricos puede causar daños irreversibles a las membranas, causando la muerte de las células (Tarek, 2005; Chen et al. Es una metodología recientemente descrita, en la que se emplean fibras de carburo de silicona de 10 a 80 μm de longitud, con un diámetro de 0,5μm, mediante, la cual, el DNA foráneo es introducido en las células vegetales, a través de los poros o agujeros que hacen las fibras de carburo de silicona, que actúan como microagujas. 2004). de la identificación rápida, sensible y específica de los virus, una [ Links ], 32. [ Links ], 67. if(MSFPhover) { MSFPnav8n=MSFPpreload("_derived/vacunas_antivirales.htm_cmp_biologia010_hbtn.gif"); MSFPnav8h=MSFPpreload("_derived/vacunas_antivirales.htm_cmp_biologia010_hbtn_a.gif"); } 150p. Building blocks for plant gene assembly. [ Links ], 62. 1994; 62: 1249-1260. 51:223-256. Novel plant transformation system by gene-coated gold particle introduction into specific cell using ArF excimer laser. Los compuestos fenólicos, monosacáridos y condiciones de pH que presenta el medio circundante son importantes para la activación del sistema de regulación de dos componentes VirA/VirB, que activa la transcripción del regulon Vir (Valentine, 2003; Tzfira et al. Eng. Current Sci. Pese a las dificultades que presenta este sistema, la fusión de liposomas que contienen ADN con protoplastos está bien establecida en la producción de plantas transgénicas. Libre de Las técnicas inmunológicas de Inmunoblot están encontrando amplias aplicaciones en el diagnóstico virológico. Microbiología. GELVIN, S. 2010. Este tipo de diagnóstico es útil para estudios epidemiológicos. Las plantas transgénicas fueron desarrolladas por primera vez a comienzos de los 80, por cuatro grupos que trabajaban de manera independiente. Entre los factores que pueden afectar de manera considerable la regeneración están la fuente del explante y su estado fisiológico, al igual que las condiciones de luz y de temperatura a que sean sometidos. Líneas Celulares Continuas: Fig. Los sistemas de transformación con los que se cuenta en la actualidad, se clasifican en métodos indirectos y métodos directos, de acuerdo con el mecanismo utilizado para la transferencia del material genético hacia la célula vegetal (Mohan Babua et al. 2006). MOK, H.; PARK T. 2008. WebBiología molecular para cuantificar índice de autofagia. Producción de anticuerpos in vitro. Al final se consiguen miles de copias de DNA del fragmento de DNA limitado por los "primers ". (Holanda). [ Links ], 20. presencia de antígenos virales previamente al desarrollo de la 309:209-221. 2007). Actualmente es posible extraer secuencias específicas de un fragmento de ADN por medio de las endonucleasas de restricción. (a) Hematoxylin and Eosin (HE) staining of liver biopsy shows well-preserved hepatocytes and portal structures. relativa del pasaje y mantenimiento en todos los laboratorios. GLEBA, Y.; MARILLONNET, S.; KLIMYUK, V. 2004. Curr. La microinyección utiliza microcapilares o microagujas de vidrio y sistemas de microscopia para depositar el DNA foráneo, en el interior de células vegetales. Fig. 2007; Escobar & Dandekar, 2003; Karami et al. Estos vectores, se obtienen a partir de la recombinación homóloga entre un plásmido pequeño que porta el T-DNA con los genes de interés y un plásmido de mayor tamaño que posee la región de supervirulencia, formando un vector co-integrado, que se introducirá a una cepa de Agrobacterium desarmada, como vector binario (Komori et al. Developing the Agrobacterium Ti plasmidas a vector for plant genetic engineering: the 2002 Benjamin Franklin Medal in life sciences presented to Mary-Dell Chilton. GRABOWSKA, A.; FILIPECKI, M. 2004. Se basa en la utilización de secuencias cortas de nucleótidos sintéticos llamados primers o cebadores, que se hibridan de forma especifica con cada una de las cadenas de DNA , previamente desnaturalizadas, llamadas moldes o templados. All-native DNA transformation: a new approach to plant genetic engineering. Disponible desde Internet en: http://www.e-gnosis.udg. En éste, se emplea la biobalística para producir daños mecánicos al disparar proyectiles sin ADN sobre el tejido vegetal a transformar, luego, a través del sistema Agrobacteriumk, como mecanismo de transmisión génica, se lleva a cabo la transformación del tejido vegetal. Se obtienen a partir de células, tejidos u órganos tomados directamente del organismo y pueden subcultivarse una o dos veces. [ Links ], 44. La confirmación serológica de una infección aguda por cualquiera de estas técnicas tradicionales esta dada por un aumento de cuatro veces o mayor en el titulo de anticuerpos cuando se emplean diluciones al doble seriadas. (Colombia) Disponible desde Internet en http://agrobio.org.co/fend/index. Se busca transformar una variedad más amplia de plantas con mejores resultados. Primero se trata a muestras con reactivos que solubilizan y desnaturalizan los ácidos nucleicos. Esto permite que se produzcan heridas en el tejido, facilitando e incrementando la infección, además como se realiza en plantas ya desarrolladas, no es necesaria la utilización de cultivo de tejidos. No hay datos concluyentes acerca de la eficacia de este método. Plant. Entre los compuestos químicos más empleados tenemos: Polietilenglicol (PEG), Fotostato de calcio y Poly-L-omotina. En este cuadro, te mostramos las ventajas y desventajas de cada uno de … 20ed. 21(3):95- 98. 2006; Deng et al. necesidad. [ Links ], 64. Debido a que sólo se amplifica el virus, se aumenta la sensibilidad sin disminuir la especificidad. Así, se facilita la posterior entrada del DNA foráneo hacia el interior de las células. Clínica y Diagnóstico Microbiológico. Para considerar que se ha logrado establecer una línea continua, esta debe de haber sido subcultivada por lo menos 70 veces. AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS VIRALES MEDIANTE UNA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR). Agrobacterium tumefaciens and the Plant: The David and Goliath of Modern Genetics. El nucleótido al cual se una la polimerasa será complementario de la base en la posición correspondiente de la cadena templado. FOX, M.; ESVELD, D.; VALERO, A.; LUTTGE, R.; MASTWIJK, H.; BARTELS, P.; VAN DEN BERG, A.; BOOM, R. 2006. Durante el tratamiento con PEG, la membrana de la célula es deformada por fuerzas de tensión superficial, causadas por las diferencias de densidades entre la solución de PEG y la solución que contiene los protoplastos a transformar y el DNA foráneo que se desea introducir. Cultivos celulares, técnicas 2003; Larik et al. Cell. 2007. específicos frente a diversas proteínas antigénicas. Se hizo una búsqueda inicial, procurando revisiones generales, usando las bases de datos "Science Direct", "Hinari" y "Medline", disponibles en el portal del sistema nacional de bibliotecas (SINAB), de la Universidad Nacional de Colombia. Normalmente, el DNA complementario se sintetiza con cebadores para la secuencia RNA de interés para actuar como sonda en el Northern blot. Según Díaz et al. [ Links ], 42. Global Status of Commercialized Biotech/GM Crops: 2009. En el curso de una infección varían las poblaciones de anticuerpos frente al agente infectante. Los EIA para la detección de antígeno se basan habitualmente en la captura del antígeno por anticuerpos específicos unidos a una fase sólida, en general el pocillo de una microplaca o una pequeña esfera de plástico. CHAKRABARTY, B.; GHOSHAL, A.; PURKAIT, M. 2008. WebAntecedentes. Estas pruebas en general se complementan o se confirman por medio de otros ensayos debido al elevado porcentaje de reacciones inespecíficas. Otro método en el que se combina el sistema Agrobacterium con ultra sonido es llamado "transformación mediada por Agrobacterium asistida con sonicación" o SAAT, por sus siglas en idioma inglés. Las principales ventajas y desventajas se enumeran a continuación: Ventajas: Su coste es bajo y son relativamente rápidos de producir (+/- 3 meses). Sin embargo la realización de la reacción es laboriosa, depende mucho de la calidad de los reactivos, requiere un microscopio de fluorescencia y de una persona con experiencia para llegar a un diagnóstico certero, así como una recolección y preparación de la muestra adecuada. Sci. [ Links ], 55. Se trata de una técnica nueva que ha sido aplicada para el diagnóstico de la infección perinatal. WebSus ventajas son el aumento del rendimiento, la exactitud, la reducción del tiempo de respuesta, la trazabilidad y menor trabajo manual; en definitiva, son coste-efectivas. 2. Powder Metal. La gran mayoría de las ventajas que presenta este sistema, se explican por el proceso de infección de las células vegetales por la bacteria y la posterior integración del el T-DNA en el genoma vegetal (Hansen & Wright, 1999; Veluthambi et al. J. Trends in Plant Sci. PITZSCHKE, A.; HIRT, H. 2010. Una vez se logra la regeneración de las plantas transgénicas a partir de células transformadas, se debe realizar la verificación del estatus transgénico de estas plantas, mediante el uso de técnicas moleculares, como PCR o "Southern blot", para determinar la inserción del transgen, RT-PCR o "Northern blot", para verificar su transcripción y "Western Blot" o ELISA, para detectar la producción de la proteína (Díaz et al. Esta técnica es rápida, sencilla y poco costosa. Proc. Phytochem. Finalmente, estos vectores virales pueden ser empleados en la transfección de la planta, como una partícula viral madura o como copias del vector viral (Gleba et al. (Polonia) 47(4):277-286. Para que la reacción tenga lugar se usa una enzima, Taq pol (ADN Polimerasa termoestable obtenida de la bacteria Thermus aquaticus) y deoxinucleótidos trifosfatos. // --> . 2003; Filipecki & Malepszy, 2006). Son aquellos que reconocen la respuesta inmune (humoral o celular) por parte del huésped: . J. Virol. Se realiza inmunológicas, técnicas de Biología Los deoxinucleótidos trifosfatos se necesitan como ladrillos para la construcción. La principal ventaja de la ingeniería genética es que no implica la transferencia de cientos de miles de genes, algunos con características no deseadas, sino que involucra el traspaso de uno o pocos genes que confieren la característica de interés (Danilova, 2007). J. Membr. [ Links ], 2. ROMMENS, C. 2004. 2002. Por ejemplo, la tecnología basada en sondas permite realizar PCR multiplex. DE OLIVEIRA, P.; OLIVEIRA, T.; NAGATA, T.; KAZUKO, A. precocidad del diagnóstico viral y su confirmación. Plant transformation: Problems and Strategies for Practical Application. Los liposomas o vesículas lipídicas están conformadas por varias bicapas de lípidos que encapsulan agua o gas, poseen diámetros del orden de nanómetros, con diferentes formas y tamaños. Posteriormente los hallazgos positivos son confirmados en la misma muestra de suero por otra metodología. 2007). if(MSFPhover) { MSFPnav6n=MSFPpreload("_derived/virus de la influenza.htm_cmp_biologia010_hbtn.gif"); MSFPnav6h=MSFPpreload("_derived/virus de la influenza.htm_cmp_biologia010_hbtn_a.gif"); } Pakistan Acad. [ Links ], 40. Se sintetiza así una cadena simple de DNA, complementaria y alineada a cada "primer ". 2005; Sanford, 2000; Taylor & Fauquet, 2002). KARAMI, O.; ESNA-ASHARI, M.; KARIMI, G.; AGHAVAISI, B. Algunos virus que afectan especies vegetales han sido empleados como vectores para la transformación de plantas, con el objetivo de producir proteínas de interés, por la expresión transitoria de genes foráneos, mediante la replicación de los virus en las plantas. contaminación con agentes extraños. JACOBSEN, E.; SCHOUTEN, H. 2007. Después del marcaje de la sonda, ésta se hibrida con el ARN en la membrana. [ Links ], 13. El aumento en el título de anticuerpos indica que el niño esta produciendo anticuerpos y por lo tanto esta infectado. 29:1021-1032. y sugerencias a los autores SHARMA, K.; SHARMA, H.; SEETHARAMA, N.; ORTIZ, R. 2002. 2002; Vain, 2007). 2003; Rao et al. También, se realizaron algunas pesquisas de complementación en idioma español, usando el buscador "google", para las palabras claves "cultivos genéticamente modificados" y "cultivos transgénicos". La primera muestra se obtendrá en el período agudo de la enfermedad y la segunda, 15 a 21 días después de la primera, en el período de convalesencia. En el 2010, se sembraron 148 millones de hectáreas de cultivos GM, por 15,4 millones de agricultores, en 29 países (James, 2010). Tiene una sensibilidad tan alta que puede amplificar una única molécula de DNA y una sola copia de genes puede ser extraída, de mezclas complejas de secuencias genómicas y visualizada como bandas diferentes en geles de agarosa. 2004; Gleba et al. 2007). Molec. 8(8):380-386. La transformación mediada por Agrobacterium fue el primer sistema de transferencia de genes en producir una planta modificada genéticamente en 1983, cuando reportaron la transferencia de genes bacterianos a plantas y de una especie vegetal a otra (Valentine, 2003; Vasil, 2007). Las ventajas y desventajas de los anticuerpos policlonales se deben principalmente a su especificidad multiepítopos. Dev. New insights into an old story: Agrobacterium induced tumour formation in plants by plant transformation. El desarrollo de // -->